O bile esculina agar É um meio de cultura sólido seletivo e diferencial. É usado como um teste diagnóstico para determinar a capacidade de um determinado microrganismo de crescer em um meio contendo bile e também quebrar o glicosídeo esculina em esculetina e glicose..
Este teste diagnóstico é utilizado para diferenciar espécies do gênero Streptococcus pertencentes ao grupo D (bile esculina positiva), de outros grupos de Streptococcus que reagem negativamente a este teste..
Deve-se observar que alguns Streptococcus do grupo viridans podem hidrolisar esculina, mas não são capazes de crescer na presença de bile na concentração de 40%, portanto, neste meio a reação para este grupo é negativa.
Por outro lado, o meio de esculina biliar também é útil para o diagnóstico de Listeria monocytogenes ou espécies de Aerococcus sp, uma vez que esses microrganismos são bile esculina positiva.
O ágar bile Esculin é composto de peptona, extrato de carne, bile de boi, esculina, citrato de ferro, ágar e água destilada. Algumas casas comerciais incluem azida de sódio na composição do meio.
O meio pode ser preparado em laboratório se você tiver todos os compostos separadamente ou pode ser preparado a partir do meio desidratado comercial..
Índice do artigo
O meio de esculina biliar contém peptonas e extrato de carne, ambos os compostos fornecem os nutrientes necessários para o crescimento de microorganismos.
Ele também contém esculina; Este composto é um glicosídeo formado pela união de um monossacarídeo simples (glicose) com um composto denominado 6,7-dihidroxicumarina ou esculetina (aglucona), ligado por uma ligação acetal ou glucosídica.
O teste se baseia em mostrar se a bactéria é capaz de hidrolisar a esculina. Se isso acontecer, a esculina se decompõe em esculetina e glicose. A esculetina reage com o ferro presente no meio, formando um composto marrom escuro, quase preto.
Isso significa que o citrato férrico atua como um revelador de reação. Esta característica torna o ágar esculina biliar um meio diferencial..
Por sua vez, a bile é um inibidor que impede o crescimento de alguns microrganismos, portanto, a bactéria, antes de partir a esculina, deve ser capaz de crescer na presença da bile. Portanto, este meio é considerado seletivo.
As bactérias que podem se desenvolver neste ambiente são principalmente aquelas que vivem no ambiente intestinal.
Nesse sentido, algumas empresas comerciais adicionam azida sódica ao meio para inibir ainda mais o crescimento de bacilos Gram negativos entéricos, aumentando a seletividade do meio para o crescimento de Streptococcus..
Finalmente, o ágar dá consistência sólida ao meio e a água é o solvente dos compostos..
Pesar:
5 g peptonas
3 g de extrato de carne
40 g de bile de boi
1 g de esculina
0,5 g de citrato de ferro
15 g de ágar
1000 ml de água destilada
No caso de adicionar azida de sódio, pesar 0,25 g / litro e adicionar à mistura.
Dissolva os componentes no litro de água destilada, aqueça até que os compostos estejam completamente dissolvidos. Distribua 5 ml em tubos de ensaio com tampa de rosca de 16 x 125 mm. Autoclave a 121 ° C, 15 libras de pressão por 15 minutos.
Retire da autoclave e incline os tubos sobre um suporte, para que o ágar se solidifique em forma de bico largo.
Guarde na geladeira até o uso. Trazer à temperatura ambiente antes de semear.
As placas de ágar esculina biliar também podem ser preparadas; neste caso, toda a mistura é autoclavada em um frasco e posteriormente distribuída em placas de Petri estéreis. Eles são deixados para solidificar e armazenados na geladeira..
O pH do meio deve ser 6,6 ± 0,2.
Pese a quantidade especificada pelo encarte. Isso pode variar de uma empresa para outra. Posteriormente, proceda da mesma forma que o procedimento explicado acima.
O pH do meio deve ser 6,6 ± 0,2. A cor do meio desidratado é bege claro e o meio preparado é âmbar escuro.
O meio de esculina biliar é usado principalmente para diferenciar Streptococcus do Grupo D (bile esculina positiva), do resto dos grupos de Streptococcus (bile esculina negativa).
Combinar o teste de crescimento em caldo hipersal com o teste de esculina biliar pode ser usado para identificar um grupo especial de Streptococcus do grupo D chamado Enterococcus.
Este grupo especial de Streptococcus pertence ao grupo D do gênero mencionado e são capazes de hidrolisar esculina na presença de bile, assim como o resto dos membros do grupo D, mas também são capazes de se desenvolver em meio hipersal (BHI com cloreto de 6,5% de sódio), propriedade que faz a diferença.
Portanto, os estreptococos que hidrolisam a bile da esculina, mas não crescem em caldo hipersal, são chamados de estreptococos do grupo D não enterococos..
Inocular o meio de preferência de um caldo Todd-Hewitt puro de 24 horas.
Adicione 2 gotas na superfície do meio com uma pipeta Pasteur e espalhe no meio com uma alça de platina..
Incubar a 35 ° C por 48 horas, enquanto o tempo de incubação é cumprido, pode ser monitorado para ver se há uma reação positiva. Se ao final do tempo a reação permanecer negativa, ela pode ser incubada por até 72 horas.
Reação positiva: Aparecimento de uma cor marrom escura, quase preta no bico da flauta (no caso do teste em tubo) ou escurecimento do ágar ao redor das colônias (no caso do teste em placa).
Reação negativa: nenhum escurecimento do meio ou preto aparece em menos da metade do tubo após 72 horas de incubação. Por outro lado, o crescimento bacteriano no meio sem o aparecimento da cor preta deve ser considerado um teste negativo..
Para avaliar a qualidade do meio, uma cepa de Enterococcus faecalis ATCC 29212 como um controle positivo e uma cepa de Streptocococus não pertencente ao grupo D como um controle negativo.
-Os meios que não contêm azida sódica permitem o crescimento de bastonetes Gram negativos entéricos. Alguns deles podem escurecer o meio.
- Algumas casas comerciais adicionam baixa concentração de bile (10%) e por isso alguns Streptococcus que não pertencem ao grupo D podem se desenvolver no meio e hidrolisar a esculina, o que pode gerar erros de interpretação..
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