O lactofenol azul ou algodão azul é uma preparação com propriedades de coloração simples. É usado em laboratórios clínicos para colorir principalmente estruturas fúngicas, como hifas, tubos germinativos e esporos..
Auxilia no diagnóstico presuntivo ou preliminar de certos fungos, porém, é sempre aconselhável reforçar o diagnóstico com exames mais específicos, como exames bioquímicos ou sorológicos..
O azul de lactofenol é composto de ácido lático, azul de anilina, glicerina, fenol e água desionizada. Pode ser preparado em laboratório ou adquirido pronto para uso. Uma vez preparado está pronto para ser usado, em hipótese alguma deve ser diluído, pois esta ação dará péssimos resultados.
A concentração de seus componentes o torna ideal para tingir estruturas fúngicas, uma vez que o fenol elimina a microbiota bacteriana que o acompanha, enquanto o ácido lático gera uma película protetora ao redor da estrutura do fungo. Finalmente, o azul de anilina tem afinidade para aderir às estruturas do fungo..
Índice do artigo
Com o azul de lactofenol, é realizada uma coloração simples das estruturas fúngicas de uma determinada cultura micológica. É chamado de simples porque usa apenas um corante.
O azul de lactofenol, além de corar, também atua como clarificante da amostra, graças à ação conjunta do ácido lático e do fenol, além disso, o fenol se comporta como mordente e ao mesmo tempo impede a lise do microrganismo por inibir o hidrolítico enzimas que podem estar presentes.
Enquanto o ácido láctico preserva a morfologia das estruturas do fungo.
Por outro lado, o azul de anilina tem a propriedade de aderir ou se ligar a estruturas contendo quitina. Estruturas manchadas de azul claro.
Deve-se observar que a parede celular dos microrganismos fúngicos, principalmente os bolores, contém quitina, por isso esse corante é ideal para a coloração desses microrganismos..
A solução de azul de lactofenol é um corante aquoso ligeiramente turvo, ligeiramente turvo, fortemente ácido, de cor azul claro. Ele permanece estável se for armazenado entre 15 ° C e 25 ° C. A garrafa deve ser mantida bem fechada. É irritante e corrosivo para a pele e as membranas mucosas.
A fórmula para preparar um litro de azul de lactofenol é a seguinte:
-250 g / L de ácido láctico
-1,0 g / L de azul de anilina ou azul de metila
-500 g / L de glicerina
-250 g / L de fenol
-250 ml de água desionizada ou destilada.
O fenol é dissolvido na água previamente aquecida. Ácido láctico e glicerina são adicionados e muito bem misturados. Finalmente, o azul de anilina se dissolve. Mistura-se novamente e está pronto para uso.
As porções para preparar 80 ml de solução de azul de lactofenol são:
-20 g de cristais de fenol
-20 ml de ácido láctico
-40 ml de glicerina ou glicerol
-20 ml de água destilada.
É utilizado para tingir estruturas fúngicas e, através das características morfológicas observadas ao nível microscópico, poder fazer um diagnóstico presuntivo do fungo.
- Uma cultura pura do fungo é retirada da qual você deseja observar suas estruturas.
- É preferível trabalhar em capela de fluxo laminar, ou sob o isqueiro, utilizando máscara e luvas, pois é necessário atender as normas de biossegurança, pois a maioria dos moldes são fáceis de espalhar no ambiente e, portanto, representam perigo ao operador.
- Uma gota de azul de lactofenol é colocada em uma lâmina..
- Um pequeno quadrado de fita adesiva de boa qualidade é cortado e cuidadosamente colado na ponta do cabo de platina, já esterilizado e frio..
- O cabo de platina é aproximado da parte mais superficial da colônia do fungo e a cultura é tocada com muito cuidado, exatamente onde a fita adesiva está localizada..
- Em seguida, é levado à lâmina e colocado logo acima da gota de azul de lactofenol, cuidando para que a fita fique perfeitamente estendida e lubrificada com o corante. O cabo de platina é removido com muita delicadeza.
- Outra gota de azul de lactofenol é colocada na fita e uma lamela por cima. Não aplique muita pressão para não destruir as estruturas do fungo, pois são extremamente frágeis. O corante deve agir por aproximadamente 3 a 4 minutos.
- Após este tempo, a preparação está pronta para ser observada ao microscópio em aumento de 10x ou 40x. Se a observação em 100X for necessária, use óleo de imersão.
- As estruturas do fungo, em geral, são tingidas de azul, com exceção dos fungos demáceos que manterão sua coloração marrom característica desse tipo de fungo..
Caso seja necessário o estudo de uma amostra biológica direta, como escarro, pus, exsudatos, secreções, entre outros, estes precisam de procedimento prévio para descontaminação da amostra. A solução de NaOH é usada para este.
No caso de amostras de cabelo, estas podem ser tingidas diretamente.
Vários fios de cabelo afetados (10 no total) são retirados das lesões presuntivas de tinea capitis (áreas alopécicas) e colocados em uma lâmina (3 a 4 fios por lâmina). Algumas gotas de azul de lactofenol são colocadas por cima e imediatamente cobertas com uma lamela..
Segure a lâmina com uma pinça e aqueça suavemente sobre um queimador. Para fazer isso, faça 3 a 4 passagens rápidas pela chama. Observe o microscópio a 40X e procure esporos fora ou dentro do cabelo (ectotrix ou endotrix respectivamente). Se necessário, adicione óleo de imersão e observe 100X.
Depois de incubar a cultura presuntiva de Candida albicans em soro humano por 2 a 4 horas a 37 ° C, tomar uma porção da solução e corar com azul de lactofenol. A preparação é observada ao microscópio a 40X. O tubo germinativo está presente e os blastosporos coram de azul brilhante.
A National Fire Protection Association (NFPA) estabelece a ficha de dados de segurança para substâncias químicas em termos do risco que representa de acordo com vários aspectos, estes são simbolizados por um losango colorido e um número que varia de 0 a 4.
Os perigos para a saúde são identificados em azul, inflamabilidade em vermelho, instabilidade ou reatividade em amarelo e qualquer perigo especial em branco..
O risco para a saúde representado pelo azul de lactofenol de acordo com a NFPA é de nível 3. Isso significa que a substância é extremamente perigosa quando ingerida ou em contato direto com a pele ou membranas mucosas..
É uma substância altamente corrosiva e irritante.
Em contato com a pele e membranas mucosas causa queimaduras graves.
Se ingerido, pode causar dor de cabeça, confusão, letargia, inconsciência, parada respiratória e até morte..
De acordo com a NFPA, o Lactofenol Azul é classificado como Nível 1 de inflamabilidade. Isso significa que ele queima apenas se for aquecido acima de 94 ° C..
Listado na NFPA no nível 0 (zero) para reatividade. Isso significa que não apresenta risco de reatividade, ou seja, é uma substância quimicamente estável..
Não oferece riscos especiais adicionais.
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