O Esfregaço de sangue É um esfregaço de sangue periférico utilizado para analisar os componentes presentes na circulação sanguínea. A observação do esfregaço de sangue fornece dados hematológicos muito úteis para o diagnóstico e acompanhamento de muitas patologias..
O esfregaço sanguíneo permite quantificar o número dos diferentes tipos de glóbulos brancos (fórmula leucocitária), bem como permite a análise da morfologia e forma dos eritrócitos, leucócitos e plaquetas..
Pode detectar anormalidades no número de células, tais como: leucocitose ou leucopenias, linfocitose ou linfopenia, neutrofilia ou neutropenia, trombocitose ou trombocitopenias e eosinofilia. Anormalidades no formato e tamanho das células também podem ser observadas..
Além disso, é possível detectar vários tipos de anemias, leucemias e infecções bacterianas ou parasitárias do sangue..
Para isso, existem vários tipos de esfregaços que são realizados dependendo do objetivo do estudo. Existem manchas finas e espessas. Esses esfregaços diferem na técnica de execução e no objetivo do estudo..
Aqueles com gotas finas são usados como um complemento para completar a hematologia. Isso fornece dados sobre a fórmula leucocitária, além da análise da forma e morfologia das três séries de células que compõem o sangue: série vermelha, série branca e plaquetas. Embora também sirvam como complemento ao estudo de esfregaço espesso.
O esfregaço espesso é utilizado para o diagnóstico de doenças causadas por hemoparasitas, como malária ou malária, toxoplasmose, leishmaniose, doença de Chagas, babesiose e microfilariose.
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Um bom esfregaço de sangue deve atender a certas características. Entre eles podemos citar:
-A amostra deve atender aos requisitos mínimos de qualidade para ser representativa.
-A amostragem deve ser bem executada.
-Execução oportuna do esfregaço.
-Se realizado com sangue venoso, use um anticoagulante que não deforme as células e misture o tubo antes de fazer o esfregaço..
-Se for feito com sangue capilar, descarte a primeira gota.
-A propagação deve ser homogênea. Isso garante que as células sejam distribuídas uniformemente e que uma boa análise das células do sangue, em termos de forma e número, possa ser feita..
-Os lados do esfregaço devem ser lisos do início ao fim.
-O esfregaço deve respeitar uma margem de 1 a 2 mm nas laterais da lâmina.
-A camada de esfregaço deve diminuir gradualmente em espessura do início ao fim (esfregaço de gota fina pelo método de lâmina).
-Deve ser devidamente rotulado para evitar confusão na amostra.
-Corrigir e corar de forma adequada para observação clara dos elementos do sangue.
-Deixe o esfregaço secar muito bem antes de montar a preparação no microscópio. A imersão em óleo em um esfregaço úmido causará a formação de micelas que impedem a visualização das células..
Os esfregaços de sangue periférico podem ser classificados em esfregaço fino e esfregaço espesso. Aqueles com uma camada fina são usados para o estudo da fórmula leucocitária e observação morfológica das células sanguíneas. Você também pode ver bactérias extracelulares, como borrelia e hemoparasitas intracelulares, como plasmódio, entre outras..
Na bolha fina, podem ser identificadas as espécies do parasita, portanto, é uma técnica mais específica que a bolha grossa, mas a bolha grossa é mais sensível, pois é uma técnica de concentração utilizada para a busca exaustiva de hemoparasitas extracelulares..
Existem dois tipos de esfregaços de gota fina: aqueles realizados em lâminas e aqueles realizados em lamínulas. Os esfregaços espessos são realizados em lâminas.
O esfregaço de sangue pode ser feito a partir de uma punção capilar ou de uma amostra venosa obtida com anticoagulante. Se for feito de sangue com anticoagulante, o esfregaço pode ser preparado em até 2 horas após a coleta da amostra..
Deve-se ter cuidado ao usar anticoagulantes que não deformam as células sanguíneas. A melhor opção é o EDTA. Ao contrário, o uso de anticoagulantes como o citrato trissódico deve ser evitado..
Se a amostra for colhida por punção capilar, o esfregaço deve ser estendido imediatamente, antes que o sangue coagule.
A primeira gota deve ser descartada, permitindo que a próxima gota escape espontaneamente para evitar a diluição da amostra com o fluido do tecido. É a técnica mais recomendada para a observação da morfologia celular, pois o sangue não possui aditivos..
Para a observação de hemoparasitas, Solari et al., Concluíram em suas pesquisas que as duas técnicas (punção venosa e capilar) são igualmente eficazes..
O esfregaço de sangue pode ser realizado manualmente em lâminas de microscópio ou em lamínula ou lâmina. Também é possível por meio de equipamentos automatizados.
É a técnica preferida pela maioria dos laboratórios devido ao seu fácil manuseio.
Usando uma pipeta Pasteur, coloque uma gota de sangue não muito espessa ou muito fina no centro de uma das extremidades de uma lâmina de microscópio limpa..
O esfregaço é feito com o auxílio de outra lâmina com ponta retificada. A lâmina de vidro fosco é colocada perpendicularmente à extremidade oposta da gota..
Ele se inclina para um ângulo entre 30 - 45 ° e desliza em direção à queda; Ao ser tocada, ela se expande linearmente sobre a borda do escorregador e com um movimento constante e definido a folha retorna; antes de chegar ao fim, o slide é levantado.
Desta forma, uma camada homogênea é espalhada sobre a superfície da lâmina receptora..
O esfregaço pode secar. Em seguida, é fixado e tingido com o corante preferido. Deixe secar bem antes de examinar ao microscópio. Uma gota de óleo é colocada na face que apresenta o esfregaço e é observada ao microscópio de luz..
Neste tipo de esfregaço, três áreas definidas podem ser distinguidas: a cabeça, o corpo e a cauda. A cabeça corresponde à zona onde começa o esfregaço, é a zona mais grossa e não é bom observar.
O corpo é a parte central ou intermediária do esfregaço, é a melhor área para se observar ao microscópio, pois ali as células se distribuem uniformemente e sua morfologia está preservada..
A cauda corresponde à parte final do esfregaço; aqui a distribuição não é mais uniforme e a morfologia eritrocitária tende a se perder.
Nessa técnica, ela desempenha um papel fundamental:
-Limpeza e desengorduramento da lâmina de microscópio: garante uma boa lâmina da amostra.
-O tamanho da gota: com gotas muito grandes será obtido um esfregaço mais espesso e longo, com uma gota muito pequena a propagação será mais curta e extremamente fina.
-A velocidade aplicada na extensão: quanto menor a velocidade o esfregaço será mais fino, maior será a velocidade ele será mais espesso.
-O ângulo de execução: quanto menor o ângulo, mais fina é a mancha, quanto maior o ângulo, mais espesso.
Não é muito utilizado por ser incômodo o manuseio das lamínulas frágeis, porém oferece grandes vantagens, pois obtém-se uma melhor distribuição das células ao longo do esfregaço..
Uma gota não muito grossa ou muito fina é colocada no centro de uma lamela. Imediatamente outra lamela é colocada em cima dela de forma que as pontas de ambas as lamelas se projetem, formando uma estrela.
A gota se espalhará espontaneamente pela superfície de ambas as lamelas. No final da extensão, cada lamela desliza para o lado oposto uma da outra (uma à direita e a outra à esquerda) rapidamente.
A técnica fornece dois esfregaços em vez de um.
Eles são colocados para secar com o lado espalhado para cima. Depois de seco, é fixado e tingido com a técnica de escolha. Deixe secar. Uma gota de óleo de imersão é colocada em uma lâmina, o esfregaço é colocado com o lado do esfregaço voltado para baixo e observado ao microscópio..
Para obter um bom esfregaço para esta técnica, é importante:
-A limpeza das lamelas (auxilia no bom deslizamento da amostra).
-O tamanho da gota (influencia a espessura do esfregaço).
-A velocidade com que as lamelas são separadas (influencia a homogeneidade do esfregaço).
Eles podem ser feitos através de qualquer um destes equipamentos: Spinner e Autoslide.
O Spinner consiste em colocar uma lâmina com uma gota de sangue em uma placa especial de centrífuga. A amostra é centrifugada em altas velocidades; assim, forma-se um esfregaço homogêneo e fino da amostra. Desvantagem da possibilidade de hemólise da amostra.
O Autoslide é um instrumento que realiza mecanicamente os movimentos para a execução do esfregaço nas lâminas. Você também pode corrigir e manchar o esfregaço. Pode até ser adaptado a alguns contadores de hematologia automáticos.
Para pesquisa de hemoparasitas, recomenda-se a realização de dois esfregaços: um com gota fina e outro com gota grossa..
Faça uma punção capilar, limpe a primeira gota. Coloque uma gota fina em uma lâmina e passe como explicado anteriormente. Para a conta grossa, coloque uma conta grande em outro slide e espalhe em um quadrado de 1,55 mm. Deixe as duas manchas secarem.
Para aqueles com gotas finas, podem ser usados pigmentos de Giemsa ou Wright, entre outros. A coloração Giemsa ou May-Grunwald Giemsa é recomendada para esfregaços espessos.
O esfregaço é fixado por 3 minutos com metanol, drenado e deixado secar novamente. O esfregaço é então coberto com corante Giemsa por 10-15 minutos. É lavado com água destilada e deixado secar. Para observar ao microscópio, uma gota de óleo de imersão é colocada.
O esfregaço é coberto com a mancha de Wright por 5 minutos. Descarte e coloque a solução tampão em pH 6,8 por 6 minutos. Sopre a preparação para homogeneizar. Lave com água destilada e deixe secar. Observe sob o microscópio.
Ocorre em estagiários da técnica de queda fina com slides.
É porque o movimento executado não foi constante durante a propagação, fazendo paradas e reinicializações.
Eles têm 2 causas: uma se deve ao fato de o escorregador ter sido levantado antes de atingir a outra extremidade do escorregador. Neste caso, é extremamente espesso e curto.
Por outro lado, se o esfregaço é curto, mas fino, é porque o tamanho da gota era muito pequeno..
Ela tem várias causas: uma é que a borda retificada está com defeito, que a pressão exercida na rampa receptora é aumentada no momento do espalhamento ou que a borda retificada da rampa está desgastada.
Devem-se ao uso de esfregaços gordurosos (mal lavados e desengordurados).
Gotas muito grandes produzirão esfregaços muito espessos do início ao fim e gotas muito pequenas produzirão esfregaços muito finos.
As células sanguíneas podem ser vistas em um esfregaço de sangue. Entre eles estão:
O número de eritrócitos ou glóbulos vermelhos é de aproximadamente 5 x 106 mm3 no homem e 4,5 x 106 nas mulheres. Os glóbulos vermelhos têm a forma de discos bicôncavos, com uma palidez fisiológica central. Pode ser visto separadamente (normal) ou empilhado em rouleaux (anormal).
Os esfregaços também mostram poiquilocitose (eritrócitos de várias formas), anisocitose (eritrócitos de vários tamanhos), anisopoiquilocitose (várias formas e tamanhos), anisocromia (cores diferentes), eritroblastos (eritrócitos imaturos), microcitose (eritrócitos menores)) e macrócitos (eritrócitos maiores).
Quando apresentam deficiência na quantidade de hemoglobina e a palidez central aumenta, diz-se que há hipocromia. Quando uma série vermelha normal é observada, ela será relatada como normocítica e normocrômica..
A quantidade normal varia de 5.000 a 10.000 mm3. Eles são alterados nos processos infecciosos, nas alergias e na leucemia. No esfregaço de sangue, vários tipos podem ser distinguidos, que são explicados a seguir.
Eles representam 55-65% do total de leucócitos. Eles medem entre 10-15 μm. Possuem núcleo segmentado ou lobado que adota várias morfologias, por isso é denominado polimorfonuclear.
Eles têm grânulos neutrofílicos abundantes em seu citoplasma e alguns azurófilos. Aumento de infecções bacterianas (neutrofilia), diminuição de infecções virais (neutropenia).
Podem ser observadas anormalidades morfológicas como pleocariocitose (núcleos hiper-segmentados), arco (células imaturas) ou macropolicitas (ovaladas e grandes)..
Outras alterações:
-Granulações tóxicas
-Neutrófilos pseudo Pelger (núcleos não ou bilobados).
-Corpos de Döhle: inclusões citoplasmáticas azul-escuras.
-Basofilia citoplasmática aumentada.
-Vacúolos intracitoplasmáticos.
-Picnose celular (perda de pontes internucleares).
Eles representam 1-3% do total de glóbulos brancos. Eles medem 9-10 μm. São caracterizados pela presença de abundantes grânulos citoplasmáticos acidofílicos e poucos azurófilos. Seu núcleo possui duas lobulações. Seu número aumenta em alergias e doenças de origem parasitária.
Eles são extremamente raros, representando 0-1% dos leucócitos. Eles medem 10-12μm. O núcleo costuma ter bordas irregulares e pode ser bilobado, mas não é observado devido ao grande número de granulações grosseiras basofílicas em seu citoplasma. Muito raramente pode ser observada basofilia.
São pequenas células com citoplasma basofílico, núcleo redondo e bem definido, com cromatina condensada. O núcleo abrange quase toda a célula. Eles representam 26-40% dos leucócitos do sangue. Eles aumentam em infecções virais (linfocitose). Linfócitos reativos podem ser vistos.
Células maiores que os linfócitos, com citoplasma maior e núcleos ovais da cromatina mais frouxos. Eles medem 9-12μm. O citoplasma é abundante e geralmente parece azul-acinzentado pálido com as técnicas de coloração padrão. Monócitos vacuolados e monocitose podem ser observados entre as alterações..
Eles medem entre 1,5-3 μm. Sua forma é redonda ou oval. O valor normal varia de 150.000 a 350.000 plaquetas / mm3. Eles podem diminuir em algumas infecções virais. Eles não têm núcleo e são roxos. Anormalidades podem ser observadas nesta série, como macro ou microplaquetas, trombocitose ou trombocitopenia e fragmentos de plaquetas.
Hemoparasitas, como o agente causador da malária ou malária (parasitas do gênero Plasmodium), podem ser observados em esfregaços de sangue. Por isso, é importante que o esfregaço seja analisado manualmente, já que equipamentos automatizados ignoram esse achado..
Em patologias como febre recorrente ou doença de Lyme, seu agente causador pode ser observado. Neste caso, corresponde aos espiroquetas Borrelia recurrenti Ainda a Borrelia Burgdorferi no esfregaço de sangue.
Casos graves são observados em leucemias, reações leucemóides e reação leucoeritroblástica, entre outros. Nas infecções bacterianas, pode haver ligeiros desvios para a esquerda (presença de vigaristas). Eritroblastos também podem ser vistos em algumas anemias.
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