O microscópio de campo escuro é um instrumento óptico especial usado em certos laboratórios. Este é o resultado de uma modificação feita na microscopia de campo claro. A microscopia de campo escuro pode ser obtida por transiluminação ou por epi-iluminação.
O primeiro se baseia no bloqueio dos raios de luz que chegam diretamente ao condensador, por meio de dispositivos que se interpõem antes que os raios de luz atinjam o condensador..
O campo escuro com luz transmitida permite destacar as estruturas, podendo observar partículas extremamente finas. As estruturas são vistas com alguma refração ou brilho em um fundo escuro.
Já o efeito de epi-iluminação é obtido com luz incidente ou oblíqua. Neste caso, o microscópio deve ser equipado com um filtro especial em forma de crescente..
Com a iluminação incidente, as estruturas observadas caracterizam-se por apresentar um efeito visual em alto relevo. Esta propriedade permite destacar as bordas das partículas suspensas.
Ao contrário da microscopia de campo claro, a microscopia de campo escuro é especialmente útil para visualizar preparações frescas contendo partículas suspensas, sem qualquer tipo de coloração..
No entanto, tem várias desvantagens, entre elas o fato de não poder ser usado para preparações secas ou pigmentadas. Não tem uma boa resolução. Além disso, para garantir uma boa imagem, a abertura numérica das objetivas não pode exceder a do condensador..
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A composição do microscópio de campo escuro apresenta modificações importantes em relação ao de campo claro, uma vez que os fundamentos de ambas as microscopias são opostos..
Enquanto no campo claro os raios de luz são concentrados de modo que passem diretamente pela amostra, no campo escuro os feixes são espalhados de forma que apenas os feixes oblíquos atinjam a amostra. Estes são então dispersos pela mesma amostra, transmitindo a imagem para a objetiva.
Se você tentasse focar um slide sem uma amostra, um círculo escuro seria observado, pois sem uma amostra não há nada para espalhar a luz em direção ao objetivo.
Para obter o efeito desejado no campo de visão, é necessário o uso de condensadores específicos, além de diafragmas que auxiliam no controle dos feixes de luz..
Em um campo de visão de campo escuro, os elementos ou partículas em suspensão aparecem brilhantes e refrativos, enquanto o resto do campo é escuro, criando um contraste perfeito..
Se a luz oblíqua ou incidente for usada, um efeito de borda com alto relevo é obtido nas estruturas observadas.
É o dispositivo pelo qual a imagem refletida e ampliada pela objetiva viaja até chegar à ocular ou oculares.
É o suporte onde se localizam os diferentes objetivos. Os alvos não são fixos, eles podem ser removidos. O revólver pode girar de tal forma que o alvo pode ser alterado quando o operador precisar..
Este parafuso é usado para focar a amostra, ele se move para frente ou para trás para trazer a amostra para mais perto ou mais longe do alvo e o movimento é grotesco..
O parafuso do micrômetro é movido para frente ou para trás para mover a amostra para mais perto ou mais longe do alvo. O parafuso micrométrico é utilizado para movimentos muito finos ou delicados, quase imperceptíveis. Ele é aquele que atinge o foco final.
É o suporte onde o corpo de prova repousará na lâmina. Possui uma abertura central por onde passam os feixes de luz. Quando os parafusos macro e micrômetro são movidos, a platina sobe ou desce, dependendo do movimento do parafuso..
O carro permite que toda a amostra seja percorrida com a objetiva. Os movimentos permitidos são para frente e para trás e vice-versa, e da esquerda para a direita e vice-versa.
Localizados no palco, são feitos de metal e têm a função de segurar o escorregador para evitar que role durante a observação. É importante que a amostra permaneça fixa enquanto está sendo observada. Os fechos têm o tamanho exato para receber o slide.
O braço une o tubo com a base. É o local onde o microscópio deve ser segurado quando vai ser movido de um lado para o outro. Com uma mão você segura o braço e com a outra segura a base.
Como o próprio nome indica, é a base ou suporte do microscópio. Graças à base, o microscópio é capaz de permanecer fixo e estável em uma superfície plana.
Eles são de forma cilíndrica. Eles têm uma lente na parte inferior que amplia a imagem que vem da amostra. Os objetivos podem ser de várias ampliações. Exemplo: 4,5X (lupa), 10X, 40X e 100X (objetiva de imersão).
A objetiva de imersão tem esse nome porque requer a colocação de algumas gotas de óleo entre a objetiva e a amostra. Os outros são chamados de alvos secos.
Os objetivos são impressos com as características que possuem.
Exemplo: marca do fabricante, correção de curvatura de campo, correção de aberração, ampliação, abertura numérica, propriedades ópticas especiais, meio de imersão, comprimento do tubo, comprimento focal, espessura da lamela e cor do anel de código.
As lentes têm uma lente frontal localizada na parte inferior e uma lente traseira localizada na parte superior.
Os microscópios antigos são monoculares, ou seja, têm apenas uma ocular, e os microscópios modernos são binóculos, ou seja, têm duas oculares..
As oculares são cilíndricas e de formato oco. Estes possuem lentes convergentes internas que expandem a imagem virtual criada pela lente..
A ocular se junta ao tubo. Este último permite que a imagem transmitida pela objetiva chegue até a ocular, que a ampliará novamente.
A ocular em sua parte superior contém uma lente chamada ocular e em sua parte inferior abriga uma lente chamada coletor.
Ele também tem um diafragma e, dependendo de onde estiver localizado, terá um nome. Aquelas que estão localizadas entre as duas lentes são chamadas de ocular Huygens e se estiverem localizadas após as 2 lentes são chamadas de ocular de Ramsden. Embora existam muitos outros.
A ampliação da ocular varia de 5X, 10X, 15X ou 20X, dependendo do microscópio.
É através da ocular ou oculares que o operador pode visualizar a amostra. Alguns modelos possuem um anel na ocular esquerda que é móvel e permite o ajuste da imagem. Este anel ajustável é chamado de anel de dioptria.
É a fonte de iluminação e está localizada na parte inferior do microscópio. A luz é halógena e é emitida de baixo para cima. Em geral, a lâmpada que os microscópios possuem é de 12 V.
O diafragma dos microscópios de campo escuro não tem íris; neste caso, evita que os raios vindos da lâmpada atinjam a amostra diretamente, apenas os feixes oblíquos tocarão na amostra. Aqueles feixes que estão dispersos pelas estruturas presentes na amostra são aqueles que irão passar para a objetiva.
Isso explica por que as estruturas parecem brilhantes e luminosas em um campo escuro..
O condensador de um microscópio de campo escuro difere daquele de um campo claro.
Existem dois tipos: capacitores refrativos e capacitores de reflexão. Este último, por sua vez, é dividido em duas categorias: parabolóides e cardióides..
Este tipo de condensador possui um disco que se interpõe para refratar os raios de luz, podendo ser localizado na parte superior da lente frontal ou na parte posterior..
É muito fácil improvisar um condensador deste tipo, pois basta colocar na frente da lente frontal do condensador um disco de papelão preto menor que a lente (diafragma)..
Um microscópio de campo claro pode ser convertido em um microscópio de campo escuro usando esta ponta..
Eles são os usados por estereomicroscópios. Existem dois tipos: parabolóides e cardióides..
-É usado para investigar a presença de Treponema pallidum em amostras clínicas.
-Também é útil para observar Borrelias e Leptospiras.
-É ideal para observar o comportamento na Vivo de células ou microrganismos, desde que não seja necessário detalhar estruturas específicas.
-É ideal para destacar a cápsula ou parede de microorganismos.
-Microscópios de campo escuro de condensador refrativo são mais baratos.
-Seu uso é muito útil na ampliação de 40X.
-Eles são ideais para observar amostras que têm um índice de refração semelhante ao meio em que são encontrados. Por exemplo, células em cultura, leveduras ou bactérias móveis, como espiroquetas (Borrelias, Leptospiras e Treponemas).
-Você pode ver o celular na Vivo, o que permite avaliar seu comportamento. Por exemplo, movimento browniano, movimento por flagelo, movimento por emissão de pseudópodes, processo de divisão mitótica, eclosão de larvas, brotamento de leveduras, fagocitose, entre outros..
-Permite destacar as bordas das estruturas, por exemplo cápsula e parede celular.
-Partículas desagregadas podem ser analisadas.
-O uso de corantes não é necessário.
-Cuidado especial deve ser tomado na montagem dos preparos, pois se forem muito espessos, não serão bem observados.
-A resolução da imagem é baixa.
-Microscópios de campo escuro usando condensadores refrativos têm uma porcentagem muito baixa de luminosidade.
-Para melhorar a qualidade da imagem com uma objetiva de imersão (100X) é necessário reduzir a abertura numérica das objetivas e assim aumentar a do cone de iluminação. Para isso, é imprescindível incorporar um diafragma adicional que possa regular a abertura numérica da objetiva..
-Você não pode visualizar lâminas secas ou coloridas, a menos que sejam manchas vitais.
-Não permite a visualização de certas estruturas, principalmente as internas.
-Microscópios de campo escuro são mais caros.
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