O nefelometria consiste em medir a radiação causada por partículas (em solução ou em suspensão), medindo assim a potência da radiação espalhada em um ângulo diferente da direção da radiação incidente..
Quando uma partícula suspensa é atingida por um feixe de luz, parte da luz é refletida, outra parte é absorvida, outra é desviada e o resto é transmitido. É por isso que quando a luz atinge um meio transparente no qual há uma suspensão de partículas sólidas, a suspensão parece turva..
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No momento em que um feixe de luz atinge as partículas de uma substância em suspensão, a direção de propagação do feixe muda de direção. Este efeito depende dos seguintes aspectos:
1. Dimensões da partícula (tamanho e forma).
2. Características da suspensão (concentração).
3. Comprimento de onda e intensidade da luz.
4. Distância de luz incidente.
5. ângulo de detecção.
6. Índice reativo do meio.
O nefelômetro é um instrumento usado para medir partículas suspensas em uma amostra líquida ou em um gás. Portanto, uma fotocélula colocada em um ângulo de 90 ° em relação a uma fonte de luz detecta a radiação das partículas presentes na suspensão..
Além disso, a luz refletida pelas partículas em direção à fotocélula depende da densidade das partículas. O Diagrama 1 apresenta os componentes básicos que compõem um nefelômetro:
Na nefelometria é de vital importância ter uma fonte de radiação com alto débito luminoso. São diversos tipos, que vão desde lâmpadas de xenônio e lâmpadas de vapor de mercúrio, lâmpadas halógenas de tungstênio, radiação laser, entre outras..
Este sistema está localizado entre a fonte de radiação e a cubeta, de forma que, desta forma, a radiação com comprimentos de onda diferentes em relação à radiação desejada seja evitada na cubeta..
Caso contrário, reações de fluorescência ou efeitos de aquecimento na solução podem causar desvios da medição..
É um recipiente geralmente prismático ou cilíndrico e pode ter tamanhos diferentes. Nele você encontrará a solução em estudo.
O detector está localizado a uma distância específica (geralmente muito próximo à cubeta) e é responsável por detectar a radiação espalhada pelas partículas em suspensão..
Geralmente é uma máquina eletrônica que recebe, converte e processa dados, que neste caso são as medidas obtidas no estudo realizado..
Cada medição está sujeita a uma porcentagem de erro, que é principalmente dada por:
Cuvetes contaminadas: nas cubetas, qualquer agente externo à solução em estudo, seja dentro ou fora da cubeta, reduz a luz radiante no caminho para o detector (cubetas defeituosas, poeira aderindo às paredes da cubeta).
Interferência: a presença de algum contaminante microbiano ou turbidez dispersa a energia radiante, aumentando a intensidade da dispersão.
Compostos fluorescentes: são aqueles compostos que, quando excitados pela radiação incidente, causam leituras errôneas e de alta densidade de espalhamento.
Armazenamento de reagentes: temperatura inadequada do sistema pode causar condições de estudo adversas e pode incitar a presença de reagentes turvos ou precipitados.
Flutuações na energia elétrica: para evitar que a radiação incidente seja uma fonte de erro, estabilizadores de tensão são recomendados para radiação uniforme.
Uma vez que a potência radiante da radiação detectada é diretamente proporcional à concentração de massa das partículas, os estudos nefelométricos têm, em teoria, uma sensibilidade metrológica maior do que outros métodos semelhantes (como a turbidimetria).
Além disso, esta técnica requer soluções diluídas. Isso permite que os fenômenos de absorção e reflexão sejam minimizados..
Os estudos nefelométricos ocupam uma posição muito importante nos laboratórios clínicos. As aplicações vão desde a determinação de imunoglobulinas e proteínas de fase aguda, complemento e coagulação.
Quando uma amostra biológica contém um antígeno de interesse, ele é misturado (em uma solução tampão) com um anticorpo para formar um complexo imune..
A nefelometria mede a quantidade de luz que é espalhada pela reação antígeno-anticorpo (Ag-Ac) e, dessa forma, complexos imunes são detectados.
Este estudo pode ser realizado por dois métodos:
Essa técnica pode ser usada para análise de ponto final, na qual o anticorpo da amostra biológica estudada é incubado por vinte e quatro horas..
O complexo Ag-Ac é medido usando um nefelômetro e a quantidade de luz espalhada é comparada com a mesma medição realizada antes da formação do complexo..
Neste método, a taxa de formação do complexo é monitorada continuamente. A taxa de reação depende da concentração do antígeno na amostra. Aqui as medições são feitas em função do tempo, então a primeira medição é feita no tempo "zero" (t = 0).
A nefelometria cinética é a técnica mais utilizada, uma vez que o estudo pode ser realizado em 1 hora, em comparação ao longo período de tempo do método do ponto final. A proporção de dispersão é medida logo após a adição do reagente.
Portanto, desde que o reagente seja constante, a quantidade de antígeno presente é considerada diretamente proporcional à taxa de mudança.
A nefelometria é geralmente usada na análise da qualidade química da água, para determinar a clareza e controlar seus processos de tratamento..
Também é usado para medir a poluição do ar, em que a concentração das partículas é determinada a partir da dispersão que elas produzem em uma luz incidente..
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