O safranina É um corante meriquinoide, denominado por ter em sua estrutura química 2 anéis benzenoides e 2 anéis quinóides, sendo estes últimos os que conferem a cor vermelha..
É também chamada de dimetil safranina ou vermelho básico 2 em sua forma abreviada, pois seu nome científico é 3,7-diamino-2,8-dimetil-5-fenil-fenazíniocloro dimetil safranina e a fórmula química é CvinteH19N4 Cl.
Existe uma variante chamada trimetil-safranina, mas não há diferença significativa entre as duas substâncias.
A safranina é um corante monocromático e, dependendo das características da fórmula química, é uma substância com carga positiva. Portanto, ele tem uma afinidade com estruturas carregadas negativamente. Essas estruturas serão manchadas de vermelho.
Esta propriedade confere aplicabilidade em muitas técnicas histológicas para corar várias estruturas celulares, tanto em organismos eucarióticos como procarióticos..
A safranina é usada como corante de contraste em técnicas importantes e bem conhecidas para uso rotineiro em bacteriologia. Essas técnicas são: a coloração de Gram-Hucker, a coloração de Schaeffer Fulton para esporos ou a coloração de cápsulas bacterianas, entre outras..
Índice do artigo
A cor do açafrão (uma especiaria obtida a partir dos estigmas da flor de Crocus sativus) foi a inspiração para nomear esta coloração. Do termo açafrão vem o nome de safranina. Isso se deve à grande semelhança entre a cor do açafrão e a coloração que esse corante proporciona..
A safranina é obtida na forma de cristais ou em pó, sendo ambas as apresentações solúveis em água. O corante safranina é inodoro. Mancha as estruturas de vermelho. As estruturas que atraem o corante safranina são chamadas de safranófilos..
Estruturalmente, a safranina é complexa, possui dois anéis benzenoides nas extremidades e no centro estão localizados os dois anéis quinóides onde se encontra o cátion N.+. O centro da estrutura é o sistema encarregado de fornecer a cor. Devido a essa característica, este corante está classificado na categoria II..
Safranin é usado para tingir várias estruturas. Destaca especialmente as células de Kulchitsky presentes no trato gastrointestinal, também chamadas de células enterocromafins.
É capaz de manchar microorganismos pertencentes à família Rickettsiaceae. Da mesma forma, é utilizado em diversas técnicas, como o método Koster, um método modificado utilizado para a coloração de bactérias do gênero. Brucella.
Por outro lado, a safranina é usada na técnica de coloração de esporos de Schaeffer Fulton e na coloração de Gram-Hucker. Em ambas as técnicas, a safranina funciona como um corante de contraste.
No primeiro, os esporos assumem a cor verde malaquita e as demais estruturas são vermelhas pela safranina. No segundo, as bactérias Gram negativas perdem a cor do cristal violeta na etapa de descoloração, portanto, a safranina é quem tinge as bactérias Gram negativas de vermelho.
Além disso, a safranina é usada em bacteriologia para preparar meio de ágar Brucella com uma diluição de 1: 5000 de safranina. Este meio serve para diferenciar as espécies Brucella suis do resto da espécie. Brucella melitensis Y Brucella abortus eles crescem neste ambiente, mas B. suis é inibido.
Na área agroindustrial, a safranina tem sido usada a 2,25% e diluída 1:10 para tingir amostras de caule de cana-de-açúcar..
Esta planta é comumente afetada pela bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli, que danifica o xilema da planta. As hastes coradas são avaliadas para determinar a função dos vasos do xilema..
Um esfregaço de sangue ou tecido é colocado em uma solução tampão (tampão fosfato pH 7,6). É permitido secar espontaneamente e então coberto com azul de metileno por 3 minutos e contrastado com safranina. Rickettsiae são coloridas de azul, contrastando com o fundo vermelho.
Um esfregaço é feito e inflamado no isqueiro para fixação. Em seguida, é coberto com uma mistura de 2 partes de safranina aquosa saturada com 3 partes de solução de KOH 1 mol / L, por 1 minuto. É lavado com água destilada e contrastado com azul de metileno carbólico a 1%..
Se a amostra contém bactérias do gênero Brucella eles aparecerão em laranja em um fundo azul.
Uma mistura de suspensão bacteriana é feita com tinta nanquim e safranina é adicionada a ela. Sob o microscópio, um halo avermelhado será observado ao redor de cada cápsula bacteriana com um fundo preto..
Um esfregaço é feito com a suspensão bacteriana. Em seguida, é fixado ao calor. É coberto com 5% de verde malaquita, freqüentemente em chamas até a emissão de vapores. O processo é repetido por 6 a 10 minutos. Finalmente, é lavado com água e contrastado com safranina 0,5% por 30 segundos. Bacilos manchados de vermelho e esporos verdes.
Um esfregaço é feito com suspensão bacteriana e fixado ao calor. Cubra a lâmina com violeta de cristal por 1 minuto. Em seguida, o lugol é colocado como uma solução mordente por 1 minuto. Posteriormente, é branqueado com álcool acetônico e finalmente contrastado com safranina por 30 segundos..
Bactérias Gram positivas coram de roxo azulado e bactérias Gram negativas de vermelho.
Alguns laboratórios deixaram de usar a técnica de Gram-Hucker para adotar a técnica de Gram-Kopeloff modificada. Neste último, a safranina é substituída pela fucsina básica. Isso ocorre porque a safranina cora fracamente as espécies do gênero Legionella, Campylobacter Y Brucella.
Cortes de tecido do trato gastrointestinal são corados com cloreto de prata. É então descolorado com tiossulfato de sódio e finalmente contrastado com safranina.
As células de Kulchitsky são diferenciadas pela presença de grânulos marrom-escuros..
Como a safranina tem carga positiva, ela se liga muito bem aos grupos carboxila e sulfato dos glicosaminoglicanos. Fazem parte dos proteoglicanos que constituem a cartilagem articular. Nesse sentido, ao se colorir com safranina O, é possível identificar se há ou não perda de cartilagem..
A perda de tecido cartilaginoso pode ser medida usando a escala de Mankin ou também chamada de escala de osteoartrose..
A técnica é explicada a seguir: o corte histológico é imerso em uma bandeja com solução de hematoxilina férrica de Weigert, passado em álcool ácido e lavado com água.
Continue o processo de coloração mergulhando a lâmina em verde rápido, é lavada com ácido acético e agora é imersa em safranina O. Para finalizar o processo é desidratada com álcoois em diferentes concentrações em ordem crescente. A última etapa requer xileno ou xilol para a amostra clarificar.
As lâminas são acondicionadas com bálsamo do Canadá ou similar para serem observadas ao microscópio..
Com esta técnica, os núcleos são corados de preto, o osso verde e a cartilagem onde os proteoglicanos se encontram de vermelho.
Pérez et al em 2003 propuseram uma técnica simples e barata para tingir macroalgas. As amostras são preparadas em cortes histológicos de parafina. Os cortes são fixados com glicerina a 1%, deixando-os secar completamente. Em seguida, é colocado em xilol para remover a parafina.
A seção é reidratada passando por uma série de bandejas contendo etanol em diferentes graus de concentração (ordem decrescente), por 2 min em cada uma..
Em seguida, é corado por 5 minutos com uma mistura 3: 1 de safranina 1% com azul de toluidina 1%, ambos preparados com etanol 50%. Três gotas de ácido pícrico são adicionadas à mistura, que atua como um mordente..
Em seguida, é desidratado passando novamente pelas bandejas de álcool, mas desta vez de forma ascendente. Por fim, é lavado com xilol e a amostra é preparada com bálsamo do Canadá para ser observada..
Felizmente, a safranina é um corante que não representa perigo para quem o manuseia. É um corante inofensivo, não é cancerígeno e não é inflamável..
O contato direto com a pele ou mucosas pode causar uma leve vermelhidão na área, sem maiores complicações. Para isso, recomenda-se lavar a área afetada com bastante água.
Ainda sem comentários