O coloração de cápsula é uma técnica de coloração diferencial que tem a propriedade de realçar a estrutura polissacarídica que envolve certas bactérias e leveduras denominada cápsula. É usado em laboratórios clínicos para ajudar no diagnóstico de certas patologias causadas por microrganismos encapsulados..
É utilizado também em laboratórios de ensino para demonstração dessa estrutura morfológica a estudantes de carreiras das ciências da saúde, tais como: medicina, bioanálise, enfermagem ou citotecnologia, entre outras..
Existem várias técnicas simples para demonstrar a presença da cápsula nos microrganismos que a possuem, são elas: a coloração negativa, a coloração de Anthony e uma variante que combina as duas anteriores..
A coloração negativa é usada principalmente em amostras de LCR quando há suspeita da presença de levedura. Cryptococcus neoformans. Esta levedura é uma causa comum de meningite.
Esta técnica utiliza nigrosina ou tinta nanquim e baseia-se na criação de um contraste entre o fundo da preparação e a cápsula impenetrável do microrganismo. O fundo fica escuro e a cápsula fica incolor. Desta forma, esta estrutura é destacada.
Em relação à técnica de Anthony, pode-se dizer que ela é mais utilizada em laboratórios de ensino para demonstrar a estrutura polissacarídica em bactérias como Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae Y Neisseria meningitidis.
A utilização dessa técnica para fins diagnósticos é muito rara, visto que existem outros exames de rotina que permitem a identificação desses microrganismos..
Índice do artigo
A cápsula é uma estrutura forte de natureza polissacarídica. Isso protege os microorganismos da fagocitose e, portanto, é uma estrutura difícil de penetrar.
É por isso que as manchas em cápsula são baseadas no contraste. Os corantes mancham o fundo da preparação enquanto a cápsula permanece incolor.
Portanto, com essas técnicas, a cápsula é facilmente reconhecível. Se o microrganismo não tiver cápsula, não será distinguível com este tipo de coloração, pois tudo ficará manchado da mesma cor..
Todas as técnicas utilizadas para colorir a cápsula têm o mesmo raciocínio, apesar de usarem corantes e procedimentos diferentes..
A mancha de Anthony usa violeta cristal como uma mancha. Isso irá manchar o corpo da bactéria e o fundo de roxo.
Por outro lado, é utilizado sulfato de cobre a 20%. Este serve como solução de lavagem, ou seja, remove o excesso de cristal violeta do preparo, tornando as cápsulas límpidas, mas sem perder a cor do corpo bacteriano ou do fundo..
- Leite iridescente.
- Lâmina de microscópio.
- 1% de cristal violeta.
- 20% de sulfato de cobre.
- Microscópio óptico.
- Óleo de imersão.
Esta técnica consiste em:
É importante não usar calor nem para fixar nem secar, pois isso danifica a cápsula. Também não lave com água.
Leite iridescente é um excelente meio de cultura, pois fornece os nutrientes necessários para o microrganismo desenvolver uma cápsula proeminente.
Por outro lado, o leite iridescente formará um fundo grosso e compacto que ficará manchado de roxo junto com o corpo bacteriano, mas a cápsula que envolve o microrganismo permanecerá incolor. Portanto, um claro halo é observado ao redor do corpo bacteriano..
É uma técnica simples de executar. Nenhuma correção necessária.
Da mesma forma, deve-se notar que outros meios de cultura podem ser usados, mas o meio de leite é o preferido porque tem a vantagem de fornecer cápsulas mais proeminentes..
É uma técnica um pouco mais trabalhosa do que a coloração negativa e sua visualização requer esperar que o preparo seque completamente..
- Lâminas de microscópio.
- Meio de cultura com o microrganismo.
- Tinta chinesa ou nigrosina.
- Microscópio óptico.
- Solução salina fisiológica.
Coloque uma gota de soro fisiológico na lamela e dissolva uma pequena porção da cultura microbiana. É importante que a preparação não seja muito espessa. Em seguida, coloque uma gota de tinta chinesa ou nigrosina e misture.
Uma folha de lamínula é então colocada sobre a preparação sem transbordar o líquido. É observado ao microscópio, primeiro focando em uma objetiva de 10X e depois movendo para 40X.
Essa técnica também pode ser usada diretamente em amostras de LCR. Ou seja, em vez de colocar uma gota de cultura microbiana, uma gota de LCR é colocada.
É um método simples de executar e ao mesmo tempo barato. Não requer fixação ou secagem do preparado.
Tem a desvantagem de ser observado ao microscópio antes que o preparo seque, pois se isso acontecer os microrganismos se contraem, o que dificultará a visualização..
Por outro lado, podem ocorrer falsos positivos se o analista for inexperiente, já que leucócitos costumam ser confundidos com leveduras..
A observação de cápsulas de levedura com tinta da China ou técnica de nigrosina deve ser considerada como um diagnóstico presuntivo de Cryptococcus neoformans até que seja demonstrado com a cultura.
Isso ocorre porque existem outras leveduras que podem ser a causa da meningite e não apenas a Cryptococcus neoformans, como os do gênero Candida e Rhodotorula, além de outras espécies de Cryptococcus.
Se houver microrganismos encapsulados, será observado um fundo escuro, com corpos transparentes flutuando no líquido, evidenciando a presença da cápsula..
Essa técnica também pode ser feita com nigrosina. É uma combinação das técnicas explicadas anteriormente. Esta técnica usa violeta cristal e tinta indiana ou nigrosina.
O corpo bacteriano fica roxo do cristal violeta porque tem carga negativa, enquanto a nigrosina colore a parte inferior do esfregaço. Se a bactéria tiver uma cápsula, ela aparecerá como um halo transparente ao redor do microorganismo..
O violeta de cristal pode ser substituído por qualquer uma destas cores: safranina, fucsina básica ou azul de metileno.
- Vidro violeta.
- Nigrosina ou tinta nanquim.
- Lâminas de microscópio.
- Microscópio.
- Cultive o microrganismo em um meio de cultura.
- Coloque uma gota da cultura na ponta de uma lâmina e ao lado coloque uma gota de nanquim ou nigrosina, misture e espalhe com a ponta de outra lâmina..
- Seque ao ar e não aqueça definido.
- Cubra com uma solução de violeta cristal por 1 minuto, lave com água destilada, mas muito delicadamente (jato suave), deixe secar ao ar.
- Observe sob um microscópio com uma objetiva de imersão. Pesquise nas extremidades da propagação.
Um corpo bacteriano de cor violeta e um fundo escuro serão vistos. A cápsula, se presente, aparecerá incolor ao redor da bactéria.
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